ELISA (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay) adalah salah satu teknik analisis protein yang sangat penting dalam bioteknologi, diagnostik medis, dan penelitian imunologi. Metode ini memungkinkan deteksi dan kuantifikasi protein, antigen, atau antibodi dalam sampel dengan sensitivitas tinggi.
Prinsip Dasar ELISA
ELISA memanfaatkan interaksi spesifik antara antigen dan antibodi, yang dikombinasikan dengan reaksi enzimatik untuk menghasilkan sinyal deteksi. Proses umum ELISA melibatkan:
- Imobilisasi antigen atau antibodi
Umumnya pada permukaan solid, seperti lempeng mikrotiter. - Penambahan reagen spesifik
Seperti antigen, antibodi, atau konjugat enzim, untuk membentuk kompleks antigen-antibodi. - Reaksi enzim-substrat
Enzim yang terkonjugasi dengan antibodi mengubah substrat menjadi produk yang dapat dideteksi, biasanya melalui perubahan warna atau emisi cahaya.
Jenis-Jenis ELISA
Ada empat format utama ELISA, masing-masing dengan keunggulan dan aplikasinya sendiri:
| Jenis ELISA | Mekanisme Kerja | Kelebihan | Kelemahan |
| Direct ELISA | Antigen dari sampel dilapisi langsung ke permukaan solid. Antibodi primer yang terkonjugasi dengan enzim ditambahkan untuk mendeteksi antigen tersebut. | – Protokol sederhana dan cepat. | – Sensitivitas rendah. – Risiko non-spesifisitas lebih tinggi karena hanya menggunakan satu antibodi. |
| Indirect ELISA | Antigen dilapisi pada permukaan solid. Antibodi primer mengikat antigen, diikuti dengan antibodi sekunder terkonjugasi enzim untuk deteksi. | – Sensitivitas lebih tinggi karena menggunakan antibodi sekunder. – Fleksibilitas dalam pemilihan antibodi sekunder dengan enzim berbeda. | – Prosedur lebih panjang. – Potensi lebih besar untuk noise akibat antibodi sekunder. |
| Sandwich ELISA | Antigen dalam sampel ditangkap oleh antibodi yang terimobilisasi (antibodi penangkap), lalu dideteksi oleh antibodi kedua (antibodi deteksi) yang terkonjugasi dengan enzim. | – Sangat spesifik, karena membutuhkan dua antibodi untuk antigen yang sama. – Cocok untuk sampel kompleks. | – Membutuhkan pengembangan pasangan antibodi spesifik. – Proses optimasi lebih rumit. |
| Competitive ELISA | Antigen dalam sampel bersaing dengan antigen terlabel (atau antigen standar) untuk berikatan dengan antibodi. Semakin banyak antigen dalam sampel, semakin rendah sinyalnya. | – Cocok untuk antigen kecil atau dengan epitop tunggal. – Dapat digunakan untuk sampel dengan konsentrasi antigen yang sangat rendah. | – Analisis lebih kompleks. – Interpretasi hasil bisa membingungkan jika tidak dipahami dengan baik. |
Aplikasi ELISA
ELISA digunakan secara luas dalam berbagai bidang, termasuk:
-
- Diagnostik Medis
Deteksi patogen (HIV, virus hepatitis), biomarker penyakit, dan antibodi. - Penelitian Imunologi
Analisis protein dalam serum, cairan tubuh, atau kultur sel. - Keamanan Pangan
Deteksi kontaminan seperti alergen, toksin, atau patogen dalam makanan. - Farmasi
Pengujian obat, analisis protein terapeutik, dan imunogenisitas.
- Diagnostik Medis
- Dan masih banyak lainnya
Kelebihan dan Kekurangan ELISA
Kelebihan:
- Sensitivitas dan spesifisitas tinggi.
- Dapat digunakan untuk sampel dengan volume kecil.
- Skalabilitas untuk pengujian masal.
Kekurangan:
- Membutuhkan antibodi berkualitas tinggi dan spesifik.
- Risiko hasil false positive atau negative jika protokol tidak dioptimalkan.
- Beberapa format memerlukan waktu pengerjaan yang lebih lama.
Kesimpulan
ELISA adalah metode yang sangat serbaguna dan penting dalam analisis protein, terutama untuk deteksi antigen atau antibodi. Dengan memahami prinsip dan jenis-jenis ELISA, Rekan AVIDA dapat memilih format yang paling sesuai untuk analisis yang diperlukan.
Referensi: The Protein Protocols Handbook, John M. Walker, 1996
